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   大多數顯微照相誤差可以追溯到顯微鏡的光學配置，包括不正確調整的照明，錯誤的過濾器的使用，或聚光鏡和/或場孔光闌的錯誤設置。下一個最常見的問題是由于標本制備不良和樣品或顯微鏡光學元件上的污垢，灰塵或污染油引起。圖1顯示了小麥銹病膿皰（由真菌小菜蛾感染引起的）的顯微照片，其顯示了幾種常見的顯微照相差錯。該圖的中心部分（包圍在一個白色的圓圈中）不對焦，左上角和右上角顯示來自場隔膜和漸暈的陰影。使用黑色的顯微照片中的對比度誤差 白色膜在圖1的左下部分中表示為在顯微照片中導致太多圖像對比度的對比度濾光片選擇不佳的區域。在圖1的右側的白色圓圈中示出了焦點問題，并且由于物鏡前透鏡上的振動，球面像差和污染油引起的樣本細節和對比度的缺乏。還包括在顯微照片中的是膜損傷誤差粉塵污染。這些和其他類似的錯誤，例如使用過于嚴重染色或過厚的標本，代表了在常規顯微照相術下面臨的最常見的顯微鏡錯誤。以下段落涉及顯微照相中的具體錯誤和故障，并提出建議的補救措施。球面像差和物鏡前透鏡上的污染油在圖1右側的白色圓圈中示出。顯微照片中還包括膜損壞誤差和灰塵污染。這些和其他類似的錯誤，例如使用過于嚴重染色或過厚的標本，代表了在常規顯微照相術下面臨的最常見的顯微鏡錯誤。以下段落涉及顯微照相中的具體錯誤和故障，并提出建議的補救措施。球面像差和物鏡前透鏡上的污染油在圖1右側的白色圓圈中示出。顯微照片中還包括膜損壞誤差和灰塵污染。這些和其他類似的錯誤，例如使用過于嚴重染色或過厚的標本，代表了在常規顯微照相術下面臨的最常見的顯微鏡錯誤。以下段落涉及顯微照相中的具體錯誤和故障，并提出建議的補救措施。例如使用過度染色或過厚的標本，代表了在常規顯微照相術下面對顯微鏡的最常見的錯誤。以下段落涉及顯微照相中的具體錯誤和故障，并提出建議的補救措施。例如使用過度染色或過厚的標本，代表了在常規顯微照相術下面對顯微鏡的最常見的錯誤。以下段落涉及顯微照相中的具體錯誤和故障，并提出建議的補救措施。

圖片失焦，模糊或銳化的 - 缺乏適當的焦點和/或模糊圖像代表了顯微照相中最常見的錯誤之一。這些誤差的來源通常是顯微鏡支架的振動或光學元件與薄膜平面之間焦距的不正確調整。通常，圖像將通過目鏡以尖銳的焦點出現，但所得的顯微照片模糊或不清晰（圖2（a））。這表明膠片平面和觀察光學元件可能不是parfocal。在裝有聚焦望遠鏡的顯微鏡中，檢查標線上的十字線以確保它們處于尖銳的焦點。仔細調整目鏡掩模版（如果配備好）與聚焦望遠鏡之間的對焦，以使兩個光罩同時對焦。如果目鏡顯示對焦的樣品，但是目鏡中的標線沒有聚焦，則樣品圖像將在膠片上看起來不清晰，反之亦然。

焦距偏差通常以低功率（1倍-4倍）的物鏡出現，其中膠片平面的焦點深度非常淺，并且顯微鏡對焦旋鈕的微小誤差導致不清晰的圖像（見圖2（a））。目鏡和聚焦望遠鏡中的光罩應該是尖銳的焦點，并且眼睛之間的瞳孔之間的距離應該被適當地保持。使用低倍率物鏡（10x），使用具有尖銳邊緣定義的臺式千分尺或樣品，仔細地將樣品對準目鏡。接下來，調整聚焦望遠鏡中的掩模版，直到圖像處于銳焦狀態，確保當疊加在空中圖像上時，該掩模版中的薄十字線也被聚焦和不同。許多制造商提供售后市集重點援助，這是一個簡單的可調節放大鏡，可用于查看聚焦望遠鏡分劃板以輔助對焦調整。調整兩個目鏡，使它們彼此對焦和聚焦望遠鏡。還要檢查投影鏡頭或光電管目鏡，確保其牢固就位。

當將標準的單反相機用于顯微照相時，圖像必須通過相機對焦取景器（通常是玻璃幕）進行聚焦。在低放大率下，屏幕不存在問題，但是如果研磨玻璃的表面太粗糙，則在較高放大倍率下聚焦變得困難。如果出現此問題，請切換到具有清晰中心的聚焦屏幕，用于圖像的關鍵焦點，或者通過將小蓋玻片固定在玻璃屏幕表面上來修改大幅面相機的聚焦屏幕（如John Delly在其書中所提到的那樣）“ 通過顯微鏡攝影 ”）使用加拿大香脂作為粘合劑。所產生的組合在屏幕覆蓋的屏幕區域中提供透明中心。Delly還建議在固定在蓋玻片上之前，使用軟鉛筆或印度墨水在玻璃表面上繪制十字或兩個對角線。該程序為視差聚焦提供了一套“十字線”。

在圖2中示出了幾個顯微鏡照片，其顯示了顯微鏡焦點的錯誤（圖2（a））和由于振動引起的鈍化圖像（圖2（c））。標本是一種薄薄的Tilia（椴木）莖，用專門為植物組織設計的四重混合物染色。圖2（a）描繪了由于由上述誤差引起的光學器件和膜平面之間的焦距的不正確調整而不對焦的典型顯微照相。右圖（圖2（c））是相同視場的顯微照片，但受到嚴重振動的影響，導致圖像銳度的損失。圖2（b）中的顯微照片說明了尖銳焦點的Tilia染色薄片。

散光和必須戴眼鏡的顯微鏡學家即使通過目鏡出現焦點，也可能難以產生清晰的圖像。佩戴眼鏡時通過聚焦望遠鏡調整樣本焦點往往特別困難。治療方法是使用一組高眼點目鏡或聚焦望遠鏡來糾正問題。請與顯微鏡制造商聯系確定這些附件是否可用。

當樣品制備太厚或顯微鏡載玻片無意中被顛倒檢查時，聚焦也可能是一個問題（圖3（a））。通常可以通過使用長工作距離物鏡來克服厚度誤差，但最佳的解決方案是使用較薄的部分重新制作樣品，或者在制劑上更緊密地擠壓蓋玻片。倒置顯微鏡載玻片的簡單固定裝置是將其翻轉，因此蓋玻璃面對物鏡（圖3（a）和3（b））。偶爾，在樣品制備期間，幾個蓋玻片將粘在一起，并且所得的顯微鏡載片將具有兩個或更多個蓋玻片，導致所得顯微照片中的球面像差問題。如果懷疑這個錯誤，仔細檢查包含蓋玻片的顯微鏡載玻片是否存在干涉條紋，這將由于兩個蓋玻片之間的殘留空間而發生。使用一對鑷子強制最上面的蓋玻片。

在高放大倍數干物鏡上校正套環的不正確調整或使用具有高數值孔徑的高干燥物鏡與錯配的蓋玻片（蓋玻片）通常是不清晰的顯微照片的原因（圖3（c））。當顯微鏡蓋玻片太厚或太薄時，這些誤差是由球面像差的欠矯或過矯矯引起的。在這種情況下，不可能精確地對準顯微鏡并獲得清晰的圖像。蓋玻片厚度問題的解決方案是用一個正確的厚度（通常是1?蓋玻璃，其平均值為0.17毫米厚，標準變化在0.16和0.19毫米之間）替換不合適的蓋玻片，或者使用配備校正領可以調整以匹配蓋玻片的厚度。如果蓋玻片厚度不能調整（即粘貼在標本滑塊上），或者如果厚度未知，并且沒有使用矯正套環的物鏡，則有時可以通過使用可比較的油浸物鏡來解決問題放大。因為浸油的折射率與蓋玻片的折射率非常相似，所以厚度變化不那么重要。

圖3所示的顯微照片顯示球面像差誤差的影響。標本是感染有枯萎病菌的馬鈴薯（Solanum tuberosum）組織的染色薄片。圖3（a）示出了反轉（倒置）顯微鏡載玻片的效果，其導致由于球面像差導致的圖像中的對比度和清晰度的損失。同樣，圖3（c）示出了在高數值孔徑和高放大率物鏡上校正套環的不正確調整。該樣品的蓋玻片厚度為0.17毫米，但校正套環的厚度為0.23毫米。圖3（b）顯示了當蓋玻片厚度優化并且顯微鏡被適當調整時，顯微照片應該如何出現。

不清晰圖像的另一個原因是物鏡前透鏡，照片目鏡（投影透鏡）的頂部鏡頭或標本滑塊上的油（來自指紋的浸油或天然油）。存在于干燥物鏡的前透鏡上的油是當將物鏡放置在預先潤滑的載玻片上的位置時可能發生的常見事故。如果立體顯微鏡可用，請取下物鏡和/或照片目鏡，并以高倍率仔細檢查。使用這種技術，在前鏡上經常會看到油污。從顯微鏡鏡頭去除油可能是困難的，并且經常導致用新的灰塵和碎屑代替存在于鏡片上的舊灰塵。首先用鏡片組織輕輕地從表面清除多余的油分，清理鏡片，然后使用手術棉或高品質鏡片紙的木制涂抹器，在用三氯乙烷，乙醚或二甲苯濃縮后將其清潔。避免使用過多的溶劑，這可以攻擊用于將鏡頭固定到其底座上的水泥。

除去污染的油后，使用駱駝毛或貂毛刷清除鏡頭上可能存在的灰塵，污垢或碎屑。可以通過將刷子浸入少量的乙醚并將其搖晃干燥來脫脂。氣球或橡膠耳塞注射器通常可用于吹脫透鏡上的松散灰塵，但不要使用罐裝空氣，因為它可能會留下比浸油更難除去的殘留物。污染浸漬油最常發生在設計用于浸漬介質的物鏡上，但是當使用浸沒物鏡觀察殘留油的蓋玻片的頂部擺動時，干燥物體也可能被污染。當遇到焦點錯誤或者具有這些物鏡的不清晰圖像時，請始終檢查干燥物鏡的前置鏡頭是否有污染。

在許多較老的顯微鏡中，物鏡與目鏡特別匹配，以便校正最終圖像中的光學像差。不清楚的圖像也可能由顯微鏡主體管和物鏡之間的管長度機械尺寸不匹配引起。用于固定管長度顯微鏡的大多數物鏡是設計為管長為160毫米，但這并不是不變的，并且使用管長不匹配的物鏡會導致球面像差的引入，從而降低圖像清晰度。管子長度要求通常刻在物鏡筒上，因此檢查該值以確保在使用前與顯微鏡兼容。具有無窮遠光學校正的物鏡旨在用于配備有管透鏡的顯微鏡，并且不適合用于較老的標準固定管長度顯微鏡。同樣，為固定管長度顯微鏡設計的物鏡不應與無窮遠校正顯微鏡一起使用。